Como identificar uma bactéria

Contente

• estágios
• Método 1 de 3: Identifique uma bactéria pela coloração de Gram
• Método 2 Realize o teste de coloração de Ziehl-Neelsen
• Método 3 de 4: Estude o comportamento e a aparência de bactérias
• Método 4 de 3: Interprete todos os resultados

Neste artigo: Identifique uma bactéria por coloração de Gram Realize o teste de coloração de Ziehl-NeelsenEstude o comportamento e a aparência das bactériasInterpretando todos os resultados43 Referências

A identificação de bactérias é uma tarefa complexa. Uma das razões é que, segundo estimativas, existem entre 10.000 e 1 bilhão de espécies bacterianas no mundo! A identificação adequada de bactérias é muito importante, especialmente no campo médico, onde o tratamento adequado de uma doença depende em grande parte do tipo de micróbio que está causando o problema. Na maioria dos casos, a identificação é feita com base na eliminação. Para identificar uma bactéria, você deve realizar testes de coloração, analisar sua aparência e observar como ela responde bem a diferentes condições. Se você precisar de um resultado rápido, colete uma amostra de DNA para enviar ao laboratório.

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Método 1 de 3: Identifique uma bactéria pela coloração de Gram

1. determinar se as bactérias forem Gram positivas ou negativas. A coloração de Gram é um método de dividir bactérias entre os dois tipos mais comuns: Gram positivo e Gram negativo. Os primeiros têm uma parede celular espessa que consiste em um polímero chamado peptidoglicano, que apresenta a melhor coloração que as paredes finas das bactérias Gram-negativas.
   • Alguns tipos comuns de bactérias Gram-positivas são estreptococos, estafilococos, micrococos (ou micrococos) e listeria.
   • Aqui estão alguns exemplos comuns de bactérias Gram-negativas: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium e Campylobacter.
2. Tome as medidas de proteção apropriadas. As bactérias e elementos químicos que você usará durante o teste representam um risco para sua saúde. Use óculos de segurança, luvas descartáveis ​​de nitrila e jaleco ao realizar o teste de coloração. Quando terminar, coloque as luvas e todos os outros materiais contaminados em um saco especial. Lembre-se de seguir os procedimentos do seu laboratório para se livrar da bolsa de produtos contaminados.
3. Coloque a amostra para observar em uma lâmina de vidro. Para iniciar o teste, coloque uma gota ou amostra bacteriana em uma lâmina estéril. Em seguida, deslize a lâmina sobre um queimador de Bunsen aceso três vezes para fixar a amostra e impedir que ela saia da placa ao enxaguar ou adicionar os reagentes.
4. Adicione 5 gotas de cristal roxo à lâmina. Despeje cinco gotas de uma solução de cristal violeta na amostra. Aguarde um minuto para que a amostra absorva o cristal violeta.
   • Segure a lâmina no lugar com pregadores de roupas para não manchar as mãos.
5. Lave bem a lâmina para remover a mancha. Use uma torneira ou uma garrafa e deixe a água correr muito lentamente por até cinco segundos para remover os resíduos de tinta que não aderiram à amostra.
6. Despeje cinco gotas de um Gram Diode Stain no slide. É uma solução composta por diodo, bicarbonato de sódio e diodeto de potássio que faz com que o violeta cristal derreta com as paredes celulares das bactérias. Despeje cinco gotas da solução na amostra e deixe agir por um minuto.
7. Lave a amostra com álcool ou ácido lático. Álcool e lacetona são agentes branqueadores e eliminam a coloração das paredes celulares bacterianas se forem Gram-negativas. Despeje algumas gotas de água sanitária na amostra e deixe-a funcionar por não mais que três segundos. Depois disso, tente enxaguar delicadamente com água por cinco segundos para remover esses agentes clareadores.
   • Se você permitir que o alvejante trabalhe por um longo período de tempo, pode resultar no desaparecimento da coloração de bactérias Gram-positivas, resultando em falso negativo.
8. Realize um teste de contraste com safranina. Safranin é um corante vermelho que contrasta com a violeta de cristal, colorindo assim as bactérias não afetadas pela coloração roxa. Despeje cerca de cinco gotas de safranina na amostra e deixe agir por um minuto. Depois disso, tente enxaguar delicadamente com água por cinco segundos.
9. Visualize sua amostra com uma ampliação de 1000X. A bactéria ficará roxa ou roxa se for Gram-positiva ou rosa se for Gram-negativa por causa da safranina.

Método 2 Realize o teste de coloração de Ziehl-Neelsen

1. Use esta técnica para detectar bactérias ácidas. Essas espécies contêm uma quantidade maior de lipídios, tornando-os mais resistentes aos corantes usados ​​na coloração de Gram. As bactérias resistentes a ácidos pertencem ao gênero Mycobacterium, que inclui a bactéria responsável pela tuberculose (M. tuberculosis). Para tingir uma bactéria resistente a ácidos, você deve usar um corante vermelho chamado fucsina carbólica, resistente ao enxágüe com soluções de ácido ácido ou sulfúrico.
2. Tome as medidas de proteção apropriadas. Os materiais químicos e biológicos usados ​​durante a coloração com Ziehl-Neelsen podem ser perigosos. Além disso, você também precisará usar fontes de calor, como um bico de Bunsen, um aquecedor elétrico ou uma lâmpada de álcool. Siga as instruções abaixo para realizar o teste.
   • Coloque óculos, luvas de nitrilo e jaleco.
   • Cuidado para não inalar os vapores dos corantes e alvejantes e não deixe as gotas respingarem nos olhos ou na pele. Mantenha os recipientes abertos sob um capô.
   • Tenha muito cuidado ao aquecer a lâmina. A maioria dos produtos químicos utilizados é inflamável. Também pode haver vestígios de substâncias inflamáveis ​​nos slides ou em outro equipamento.
3. Prepare a lâmina. Com movimentos circulares, espalhe uniformemente uma pequena quantidade da amostra bacteriana no centro de uma lâmina estéril. Sua amostra deve ocupar cerca de 10 mm por 20 mm.
4. Seque a lâmina. Coloque a lâmina na estrutura de secagem com a amostra voltada para cima. Deixe secar naturalmente por 30 segundos. Não tente secar a lâmina com um pano.
5. Prenda a amostra com calor. Com a amostra levantada, deslize a lâmina duas ou três vezes sobre um queimador de Bunsen aceso. Você também pode colocar a lâmina em um aquecedor elétrico, ajustando a temperatura entre 65 ° C e 75 ° C por pelo menos duas horas. Cuidado para não ferver ou queimar a amostra.
6. Adicione a fucsina carbólica à lâmina. Despeje várias gotas desta solução na lâmina. Despeje o suficiente para cobrir completamente a amostra.
7. Aqueça a lâmina para fixar o corante. Aqueça a lâmina cuidadosamente sobre um queimador de Bunsen ou uma lâmpada de álcool, com a amostra voltada para cima, ou coloque-a em um aquecedor elétrico. Aqueça a lâmina a 60 ° C ou até começar a liberar vapor. Deixe o corante agir por cinco minutos.
   • Se você estiver usando um aquecedor elétrico, ligue-o a 60 ° C. Se você optar pela lâmpada de álcool ou pelo queimador de Bunsen, espere ver fumaça.
   • Para manter a lâmina na temperatura desejada por cinco minutos, aqueça-a intermitentemente.
   • Cuidado para não ferver, queimar ou secar a amostra.
8. Lave a lâmina com água fria. Deixe esfriar por cinco minutos e enxágue delicadamente por alguns segundos com água limpa. Use água da torneira ou uma garrafa de pressão para remover manchas de tinta que não aderiram à amostra.
9. Despeje sobre a amostra de álcool ácido ou ácido sulfúrico. Use um volume de 3% em volume (v / v) de álcool ou 20% de ácido sulfúrico para cobrir completamente a amostra. Deixe o ácido trabalhar até a cor desbotar e atingir uma tonalidade rosa muito brilhante. O processo geralmente leva cerca de dez minutos.
10. Use água limpa para enxaguar a lâmina. Lave cuidadosamente a lâmina com uma torneira ou usando uma garrafa de compressão. Remova todos os resíduos de ácido e corante.
11. Adicione o agente de contraste. Depois de enxaguar a lâmina, despeje o corante de verde malaquita ou azul de metileno. Essas duas soluções criam um fundo azulado ou esverdeado no qual o corante vermelho emergirá, além de outros materiais biológicos, como células humanas e bactérias resistentes a ácidos. Deixe as substâncias trabalharem por um a dois minutos.
12. Enxágue e seque a lâmina. Enxágue abundantemente com água para remover o excesso de contraste. Quando terminar, seque a parte de trás da lâmina com um pano seco e deixe secar naturalmente em um suporte.
13. Visualize sua amostra com uma ampliação de 1000X. As bactérias resistentes a ácidos ficam vermelhas ou rosa escuro. Outras bactérias, células não bacterianas e a base da lâmina ficarão verdes ou azuis.

Método 3 de 4: Estude o comportamento e a aparência de bactérias

1. Analise a forma das bactérias. Depois de realizar o teste de coloração para determinar se as bactérias são Gram-positivas, Gram-negativas ou resistentes a ácidos, é hora de identificar as espécies com mais precisão. Primeiro, analise a forma das bactérias no slide. As três formas mais comuns são cocos (esféricos), espirais e bacilos (forma de bastão).
   • Existem várias variantes desses formulários. Bactérias de formato redondo (cocos), por exemplo, podem aparecer em pares (diplococos), em cadeias, em montões ou em grupos de quatro (tétrades).
2. Descubra se a bactéria é aeróbica ou anaeróbica. Colete duas amostras de bactérias e crie duas culturas separadas. A lua deve ser anaeróbica (cultivada sem oxigênio), enquanto a outra deve ser aeróbica (cultivada com oxigênio). Armazene a cultura anaeróbica a 35 ° C em um local sem oxigênio por pelo menos 48 horas antes de observar o crescimento.
   • Se as bactérias crescem em um ambiente sem oxigênio, mas não quando expostas ao oxigênio, isso significa que são anaeróbias.
   • Embora se desenvolvam em um ambiente oxigenado, mas não na ausência de oxigênio, são aeróbicos.
   • Quando eles se desenvolvem nos dois ambientes, falamos sobre bactérias anaeróbicas facultativas.
3. Realize um teste de motilidade. Uma bactéria é móvel se puder se mover sozinha com um ou mais flagelos. O grau de motilidade é muito importante na identificação de certas espécies bacterianas. Existem vários tipos de motilidade, mas a maneira mais segura e legível é o meio semi-sólido.
4. Crie uma cultura para o teste de motilidade. Prepare uma cultura de bactérias em um caldo de cultura. Siga as instruções abaixo para preparar o caldo de sua escolha.
5. Inocular a cultura em um ágar semi-sólido para testes de motilidade. Revista uma porção da cultura do caldo com uma agulha de inoculação estéril. Plante cuidadosamente a agulha no tubo semi-sólido dagar, como o TTC lagar, que você preparou para o teste. A agulha deve penetrar 2/3 do ágar.
   • Quando terminar, remova cuidadosamente a agulha, tomando cuidado para não exceder os limites da zona de inoculação.
   • Incubar o tubo a 30 ° C por 48 horas.
6. Leia o resultado do teste. O ágar para o teste de motilidade ficará vermelho em contato com bactérias. Se forem móveis, esse tom vermelho ou rosado se espalhará por toda a substância. Caso contrário, a coloração será limitada ao local da injeção.

Método 4 de 3: Interprete todos os resultados

1. Reúna seus comentários. Para conhecer o tipo de bactéria, você precisará coletar as informações obtidas das culturas, os testes de coloração e a observação dos formulários. Se você estiver examinando as amostras de um paciente, os sintomas que eles apresentam também podem ajudar a determinar o tipo de bactéria apropriado.
   • Por exemplo, se os testes mostram que as bactérias são gram-negativas, anaeróbias, não móveis e você percebe sintomas como dor abdominal, náusea e vômito no paciente, é provável que ele sofra da infecção por Bacteroides. fragilis.
2. Consulte um banco de dados. Existem milhares de espécies de bactérias no mundo. É impossível saber tudo de cor. Você provavelmente precisará consultar um livro de microbiologia clínica ou banco de dados on-line para comparar os resultados dos testes com informações sobre espécies bacterianas.
   • Existem excelentes recursos online para identificar bactérias, mas a maioria desses bancos de dados está disponível em inglês, incluindo Patricbrc.org e GlobalRPh. No entanto, você ainda pode encontrar informações úteis no site do Centro Internacional de Recursos Microbianos da INRA.
3. Faça um teste genético para conhecer as espécies exatas das bactérias. Em alguns casos, pode ser necessário identificar as espécies de bactérias. O método mais rápido e fácil é realizar um teste de DNA. Os testes de DNA também são úteis para identificar bactérias resistentes às formas tradicionais de coloração e cultura. Atualmente, os testes de DNA em microrganismos são muito rápidos e podem estar prontos em menos de duas horas.
   • Se você não tiver acesso a um laboratório que realiza o sequenciamento genético de microrganismos, envie uma amostra de bactéria para uma agência especializada.